Richard Dawkins. Unweaving the Rainbow / Ричард Докинз. Расплетая радугу: 5 BARCODES AT THE BAR / 5 ШТРИХ-КОДЫ В СУДЕ
| Английский оригинал | Перевод на русский | |
|---|---|---|
Сожалеем, но текст оригинала доступен только зарегистрированным пользователям. |
Снабжая синтезирующую машинку радиоактивным сырьем, вы делаете радиоактивными сами зонды, и таким образом их "маркируете". cosinus 23.10.11 в 05:03 |
+1 |
|
Это позволяет позже легко обнаружить зонды снова, поскольку естественная ДНК не радиоактивна, поэтому их легко отличить друг от друга. cosinus 23.10.11 в 05:17 |
||
|
Радиоактивные зонды - это тот инструмент, который Вы должны иметь наготове, прежде чем начнете использовать фингерпринтинг Джеффри. cosinus 23.10.11 в 05:23 |
||
|
Другим необходимым инструментом является "рестрикционный фермент". cosinus 23.10.11 в 05:27 |
||
|
Рестрикционные ферменты - это химические инструменты, которые специализируются на разрезании ДНК, но разрезании только в определенных местах. cosinus 23.10.11 в 05:31 |
||
|
Например, один рестрикционный фермент может обследовать протяженность хромосомы, пока не найдет последовательность GAATTC (G, C, T и A - четыре буквы алфавита ДНК; все гены у всех видов на Земле отличаются только тем, что составлены из различных последовательностей из этих четырех букв). cosinus 23.10.11 в 05:41 |
||
|
Другой рестрикционный фермент разрезает ДНК везде, где найходит последовательность GCGGCCGC. cosinus 23.10.11 в 09:34 |
||
|
В комплекте инструментов молекулярного биолога имеется множество различных рестрикционных ферментов. cosinus 23.10.11 в 09:36 |
||
|
Они образуются бактериями, использующими их в целях собственной защиты. cosinus 23.10.11 в 09:39 |
||
|
У каждого рестрикционного фермента есть своя собственная уникальная искомая цепочка, которая наводит ее на цель и разрезает. cosinus 23.10.11 в 09:46 |
||
|
Теперь фокус в том, чтобы выбрать рестрикционный фермент, чья собственная искомая цепочка полностью отсутствует в интересующем нас тандемном повторе. cosinus 23.10.11 в 09:53 |
||
|
Поэтому ДНК по всей длине нарезается на короткие отрезки, ограниченные характерной искомой цепочкой рестрикционного фермента. cosinus 23.10.11 в 09:58 |
||
|
Конечно, не все отрезки будут содержать тандемный повтор, который мы ищем. cosinus 23.10.11 в 09:59 |
||
|
Всевозможные другие отрезки ДНК могут быть окружены искомой цепочкой, предпочитаемой ножницами рестрикционного фермента. cosinus 23.10.11 в 10:15 |
||
|
Но некоторые из них будут состоять из тандемных повторов, и длина каждого разрезанного ножницами отрезка будет во многом определяться числом тандемных повторов в нем. cosinus 23.10.11 в 10:19 |
||
|
Если у меня будет 147 повторов конкретного куска ДНК-бессмыслицы, там где у Вас только 83, то мои нарезанные фрагменты будут соответственно более длинными, чем Ваши. cosinus 23.10.11 в 10:23 |
||
|
Мы можем измерить эти характерные длины, используя технику, которая существует в молекулярной биологии уже долгое время. cosinus 23.10.11 в 10:24 |
||
|
Это обычная процедура, которая довольно похожа на рассеивание призмой, как сделал Ньютон с белым светом. cosinus 23.10.11 в 10:28 |
||
|
Стандартная "призма" ДНК представляет собой колонку гель-электрофореза, то есть длинную трубку, заполненную желе, через которое пропускают электрический ток. cosinus 23.10.11 в 10:31 |
||
|
Раствор, содержащий вырезанные отрезки ДНК, смешанные все вместе, заливают в один конец трубки. cosinus 23.10.11 в 10:36 |
||
|
Все фрагменты ДНК электрически притягиваются к отрицательному концу колонки, находящейся в другом конце трубки, и они равномерно движутся через желе. cosinus 23.10.11 в 10:40 |
||
|
Но не все движутся с одной и той же скоростью. cosinus 23.10.11 в 10:41 |
||
|
Подобно тому как свет с низкой частотой колебаний, распространяется сквозь стекло, маленькие фрагменты ДНК перемещаются быстрее, чем большие. cosinus 23.10.11 в 10:45 |
||
|
В итоге, если Вы выключаете ток через соответствующий промежуток времени, фрагменты раскладываются по колонке, так же как раскладываются цвета Ньютона, потому что свет синего конца спектра с большей легкостью замедляется стеклом, чем свет красного конца. cosinus 23.10.11 в 10:54 |
||
|
Но мы еще не можем видеть фрагменты. cosinus 23.10.11 в 10:56 |
||
|
Колонка желе выглядит одинаковой по всей высоте. cosinus 23.10.11 в 10:58 |
||
|
Нет ничего, что бы указывало на то, что фрагменты ДНК различного размера скрываются в дискретных полосах на ее протяжении, и ничего, что бы указывало, какая полоса содержит какой ряд тандемных повторов. cosinus 23.10.11 в 11:03 |
||
|
Как мы делаем их видимыми? Здесь в дело вступают радиоактивные зонды. cosinus 23.10.11 в 11:05 |
||
|
Чтобы сделать их видимыми, Вы можете использовать другой хитроумный метод, саузерн-блоттинг, названный в честь его изобретателя, Эдварда Саузерна. cosinus 23.10.11 в 11:10 |
||
|
(Может несколько сбивать то, что есть другие методы, названные нозерн-блоттинг и вестерн-блоттинг, хотя нет никакого м-ра Нозерна или м-ра Вестерна.) cosinus 23.10.11 в 11:16 |
||
|
Колонка желе вынимается из трубки и укладывается на промокательной бумаге. cosinus 23.10.11 в 11:18 |
||
|
Жидкость в желе, содержащая фрагменты ДНК, просачивается из желе на промокательную бумагу. cosinus 23.10.11 в 11:19 |
||
|
В промокательную бумагу предварительно вплетено множество радиоактивных зондов для определенных интересующих нас тандемных повторов. cosinus 23.10.11 в 11:26 |
||
|
Исследуемые молекулы выстраиваются в линию на промокательной бумаге, располагаясь точно парами, по обычным правилам ДНК, со своими напарниками в тандемных повторах. cosinus 23.10.11 в 11:34 |
||
|
Излишек исследуемых молекул смывается. cosinus 23.10.11 в 11:36 |
||
|
Теперь единственные исследуемые радиоактивные молекулы, оставшиеся в промокательной бумаге - это те, которые связались со своими напарниками выхваченными из желе. cosinus 23.10.11 в 11:39 |
||
|
Промокательная бумага затем помещается на кусок рентгеновой пленки, на которой потом радиоактивность оставляет след. cosinus 23.10.11 в 11:45 |
||
|
Поэтому то, что Вы видите, когда проявите пленку - это ряд темных полос, еще один штрихкод. cosinus 23.10.11 в 11:48 |
||
|
Окончательный узор штрихкода, который мы читаем на саузерн-блоттинге, является "отпечатками пальцев" личности, точно так же, как фраунгоферовы линии являются "отпечатками пальцев" для звезды, или линии форманты - "отпечатками пальцев" для гласного звука. cosinus 23.10.11 в 11:57 |
||
|
Действительно, штрихкод, полученный из крови, выглядит очень похоже на фраунгоферовы линии или линии форманты. cosinus 23.10.11 в 11:59 |
||
|
Подробности метода фингерпринтинга ДНК весьма сложны, и я не буду сильно в них вдаваться. cosinus 23.10.11 в 12:04 |
||
|
Например, одна стратегия состоит в том, чтобы обработать ДНК одновременно большим количеством зондов. cosinus 23.10.11 в 12:06 |
||
|
И вы получаете, тогда ассортимент полос штрихового кода одновременно. Irina73 27.08.11 в 21:33 |
||
|
В чрезвычайных случаях полосы сливаются друг с другом, и все, что Вы получаете, - это один большой мазок со всеми возможными размерами фрагментов ДНК, представленных где-либо в геноме. cosinus 23.10.11 в 12:14 |
||
|
Это не хорошо для целей идентификации. cosinus 23.10.11 в 12:16 |
||
|
В другой крайности, люди используют только один зонд, за раз ищущий один генетический "локус". cosinus 23.10.11 в 12:18 |
||
|
Этот "однолокусовый фингерпринтинг" дает Вам хорошие, чистые полосы, как фраунгоферовы линии. cosinus 23.10.11 в 12:21 |
||
|
Но только одну или две полосы на человека. Irina73 27.08.11 в 21:40 |
||
|
Даже в этом случае шансы спутать людей малы. cosinus 23.10.11 в 12:47 |
||
|
Причина в том, что характеристики, о которых мы говорим, не похожи "на карие глаза против голубых", когда многие люди были бы одинаковыми cosinus 23.10.11 в 12:49 |
