Richard Dawkins. Unweaving the Rainbow / Ричард Докинз. Расплетая радугу: 5 BARCODES AT THE BAR / 5 ШТРИХ-КОДЫ В СУДЕ

← →
Английский оригинал Перевод на русский

Сожалеем, но текст оригинала доступен только зарегистрированным пользователям.

Снабжая синтезирующую машинку радиоактивным сырьем, вы делаете радиоактивными сами зонды, и таким образом их "маркируете".

cosinus 23.10.11 в 05:03

0
+1

Это позволяет позже легко обнаружить зонды снова, поскольку естественная ДНК не радиоактивна, поэтому их легко отличить друг от друга.

cosinus 23.10.11 в 05:17

0

Радиоактивные зонды - это тот инструмент, который Вы должны иметь наготове, прежде чем начнете использовать фингерпринтинг Джеффри.

cosinus 23.10.11 в 05:23

0

Другим необходимым инструментом является "рестрикционный фермент".

cosinus 23.10.11 в 05:27

0

Рестрикционные ферменты - это химические инструменты, которые специализируются на разрезании ДНК, но разрезании только в определенных местах.

cosinus 23.10.11 в 05:31

0

Например, один рестрикционный фермент может обследовать протяженность хромосомы, пока не найдет последовательность GAATTC (G, C, T и A - четыре буквы алфавита ДНК; все гены у всех видов на Земле отличаются только тем, что составлены из различных последовательностей из этих четырех букв).

cosinus 23.10.11 в 05:41

0

Другой рестрикционный фермент разрезает ДНК везде, где найходит последовательность GCGGCCGC.

cosinus 23.10.11 в 09:34

0

В комплекте инструментов молекулярного биолога имеется множество различных рестрикционных ферментов.

cosinus 23.10.11 в 09:36

0

Они образуются бактериями, использующими их в целях собственной защиты.

cosinus 23.10.11 в 09:39

0

У каждого рестрикционного фермента есть своя собственная уникальная искомая цепочка, которая наводит ее на цель и разрезает.

cosinus 23.10.11 в 09:46

0

Теперь фокус в том, чтобы выбрать рестрикционный фермент, чья собственная искомая цепочка полностью отсутствует в интересующем нас тандемном повторе.

cosinus 23.10.11 в 09:53

0

Поэтому ДНК по всей длине нарезается на короткие отрезки, ограниченные характерной искомой цепочкой рестрикционного фермента.

cosinus 23.10.11 в 09:58

0

Конечно, не все отрезки будут содержать тандемный повтор, который мы ищем.

cosinus 23.10.11 в 09:59

0

Всевозможные другие отрезки ДНК могут быть окружены искомой цепочкой, предпочитаемой ножницами рестрикционного фермента.

cosinus 23.10.11 в 10:15

0

Но некоторые из них будут состоять из тандемных повторов, и длина каждого разрезанного ножницами отрезка будет во многом определяться числом тандемных повторов в нем.

cosinus 23.10.11 в 10:19

0

Если у меня будет 147 повторов конкретного куска ДНК-бессмыслицы, там где у Вас только 83, то мои нарезанные фрагменты будут соответственно более длинными, чем Ваши.

cosinus 23.10.11 в 10:23

0

Мы можем измерить эти характерные длины, используя технику, которая существует в молекулярной биологии уже долгое время.

cosinus 23.10.11 в 10:24

0

Это обычная процедура, которая довольно похожа на рассеивание призмой, как сделал Ньютон с белым светом.

cosinus 23.10.11 в 10:28

0

Стандартная "призма" ДНК представляет собой колонку гель-электрофореза, то есть длинную трубку, заполненную желе, через которое пропускают электрический ток.

cosinus 23.10.11 в 10:31

0

Раствор, содержащий вырезанные отрезки ДНК, смешанные все вместе, заливают в один конец трубки.

cosinus 23.10.11 в 10:36

0

Все фрагменты ДНК электрически притягиваются к отрицательному концу колонки, находящейся в другом конце трубки, и они равномерно движутся через желе.

cosinus 23.10.11 в 10:40

0

Но не все движутся с одной и той же скоростью.

cosinus 23.10.11 в 10:41

0

Подобно тому как свет с низкой частотой колебаний, распространяется сквозь стекло, маленькие фрагменты ДНК перемещаются быстрее, чем большие.

cosinus 23.10.11 в 10:45

0

В итоге, если Вы выключаете ток через соответствующий промежуток времени, фрагменты раскладываются по колонке, так же как раскладываются цвета Ньютона, потому что свет синего конца спектра с большей легкостью замедляется стеклом, чем свет красного конца.

cosinus 23.10.11 в 10:54

0

Но мы еще не можем видеть фрагменты.

cosinus 23.10.11 в 10:56

0

Колонка желе выглядит одинаковой по всей высоте.

cosinus 23.10.11 в 10:58

0

Нет ничего, что бы указывало на то, что фрагменты ДНК различного размера скрываются в дискретных полосах на ее протяжении, и ничего, что бы указывало, какая полоса содержит какой ряд тандемных повторов.

cosinus 23.10.11 в 11:03

0

Как мы делаем их видимыми? Здесь в дело вступают радиоактивные зонды.

cosinus 23.10.11 в 11:05

0

Чтобы сделать их видимыми, Вы можете использовать другой хитроумный метод, саузерн-блоттинг, названный в честь его изобретателя, Эдварда Саузерна.

cosinus 23.10.11 в 11:10

0

(Может несколько сбивать то, что есть другие методы, названные нозерн-блоттинг и вестерн-блоттинг, хотя нет никакого м-ра Нозерна или м-ра Вестерна.)

cosinus 23.10.11 в 11:16

0

Колонка желе вынимается из трубки и укладывается на промокательной бумаге.

cosinus 23.10.11 в 11:18

0

Жидкость в желе, содержащая фрагменты ДНК, просачивается из желе на промокательную бумагу.

cosinus 23.10.11 в 11:19

0

В промокательную бумагу предварительно вплетено множество радиоактивных зондов для определенных интересующих нас тандемных повторов.

cosinus 23.10.11 в 11:26

0

Исследуемые молекулы выстраиваются в линию на промокательной бумаге, располагаясь точно парами, по обычным правилам ДНК, со своими напарниками в тандемных повторах.

cosinus 23.10.11 в 11:34

0

Излишек исследуемых молекул смывается.

cosinus 23.10.11 в 11:36

0

Теперь единственные исследуемые радиоактивные молекулы, оставшиеся в промокательной бумаге - это те, которые связались со своими напарниками выхваченными из желе.

cosinus 23.10.11 в 11:39

0

Промокательная бумага затем помещается на кусок рентгеновой пленки, на которой потом радиоактивность оставляет след.

cosinus 23.10.11 в 11:45

0

Поэтому то, что Вы видите, когда проявите пленку - это ряд темных полос, еще один штрихкод.

cosinus 23.10.11 в 11:48

0

Окончательный узор штрихкода, который мы читаем на саузерн-блоттинге, является "отпечатками пальцев" личности, точно так же, как фраунгоферовы линии являются "отпечатками пальцев" для звезды, или линии форманты - "отпечатками пальцев" для гласного звука.

cosinus 23.10.11 в 11:57

0

Действительно, штрихкод, полученный из крови, выглядит очень похоже на фраунгоферовы линии или линии форманты.

cosinus 23.10.11 в 11:59

0

Подробности метода фингерпринтинга ДНК весьма сложны, и я не буду сильно в них вдаваться.

cosinus 23.10.11 в 12:04

0

Например, одна стратегия состоит в том, чтобы обработать ДНК одновременно большим количеством зондов.

cosinus 23.10.11 в 12:06

0

И вы получаете, тогда ассортимент полос штрихового кода одновременно.

Irina73 27.08.11 в 21:33

1

В чрезвычайных случаях полосы сливаются друг с другом, и все, что Вы получаете, - это один большой мазок со всеми возможными размерами фрагментов ДНК, представленных где-либо в геноме.

cosinus 23.10.11 в 12:14

0

Это не хорошо для целей идентификации.

cosinus 23.10.11 в 12:16

0

В другой крайности, люди используют только один зонд, за раз ищущий один генетический "локус".

cosinus 23.10.11 в 12:18

0

Этот "однолокусовый фингерпринтинг" дает Вам хорошие, чистые полосы, как фраунгоферовы линии.

cosinus 23.10.11 в 12:21

0

Но только одну или две полосы на человека.

Irina73 27.08.11 в 21:40

0

Даже в этом случае шансы спутать людей малы.

cosinus 23.10.11 в 12:47

0

Причина в том, что характеристики, о которых мы говорим, не похожи "на карие глаза против голубых", когда многие люди были бы одинаковыми

cosinus 23.10.11 в 12:49

0
Минутку...

← Предыдущая страница

Следующая страница →